糖皮質(zhì)激素類藥殘留分析技術(shù)測(cè)定方法——毛細(xì)管電泳法

時(shí)間：2023-03-25 03:03:45來源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

糖皮質(zhì)激素類藥殘留分析技術(shù)測(cè)定方法——毛細(xì)管電泳法

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

10.1.4.2 測(cè)定方法

GCs的測(cè)定方法主要有毛細(xì)管電泳法(CE)、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)、氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS)和免疫學(xué)方法(IA)等。

(1)毛細(xì)管電泳法(capillary electrophoresis，CE)

1)毛細(xì)管區(qū)帶電泳(capillary zone electrophoresis，CZE)

CZE是CE中最常見的分離模式，是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為。上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。CZE用以分析帶電溶質(zhì)，樣品中各個(gè)組分因?yàn)檫w移率不同而分成不同的區(qū)帶。Baeyens等建立了檢測(cè)淚液中地塞米松磷酸鈉及其代謝物地塞米松的CZE方法。電泳緩沖液為100mmol/L四硼酸鈉緩沖液，電壓為25kV，5kPa壓力進(jìn)樣，時(shí)間20s，毛細(xì)管柱的總長(zhǎng)度為64.5cm、有效長(zhǎng)度為56.0cm、內(nèi)徑為50um、外徑為375um，柱溫為25℃，二極管陣列(DAD)檢測(cè)器在190～600nm全波長(zhǎng)掃描。該方法的LOD和LOQ分別為0.5μg/mL和2.0μg/mL，線性范圍為2～100ug/mL。

2)毛細(xì)管膠束電動(dòng)力學(xué)色譜(micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC)

MECC為一種基于膠束增溶和電動(dòng)遷移的新型液體色譜，在緩沖液中加入離子型表面活性劑作為膠束劑，利用溶質(zhì)分子在水相和膠束相分配的差異進(jìn)行分離。MECC柱效高，流行平面沒有譜帶擴(kuò)展，散熱好，膠束本身處于動(dòng)態(tài)，和離子接觸多，分離效率高。由于應(yīng)用的表面活性劑的種類不同，明顯改變分離效果，加有機(jī)感性劑，可改變MECC選擇性，從而大大提高分離效能。適合于中性物質(zhì)的分離，還可以分析離子，亦可區(qū)別手性化合物，而且，成本低，操作簡(jiǎn)單。Noe等建立了檢測(cè)血清中潑尼松龍的MECC方法。血清樣品經(jīng)C18固相萃取柱凈化，在一-定的壓力(20mbar，0.06min)下注入熔融石英毛細(xì)管(id.50mm，總長(zhǎng)度66cm，有效長(zhǎng)度49.5cm)，自動(dòng)進(jìn)樣器的溫度為20℃±0.1℃，毛細(xì)管爐的溫度為25℃±0.1℃，采用30kV恒壓(電流為65mA)在10min內(nèi)分離，磷酸鹽-四硼酸鹽緩沖液(pH8.0，20mmol/L)用于定量測(cè)定潑尼松龍，紫外檢測(cè)器(UVD)在254nm檢測(cè)。該方法的線性范圍為0.5～4μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.990，LOD為250ng/mL，LOQ為500ng/mL。

3)加壓毛細(xì)管電色譜(pressurized capillary electrochromatography，pCEC)

pCEC是近年發(fā)展起來的一種新型微分離分析技術(shù)，它整合了CE與HPLC的優(yōu)點(diǎn)，通過在填充有HPLC填料的毛細(xì)管電色譜柱兩端施加高壓直流電場(chǎng)，樣品在CE柱中的保留行為同時(shí)受到電滲流及其在流動(dòng)相與固定相之間分配系數(shù)的影響，雙重分離機(jī)制大大提高了樣品分離能力，適用于復(fù)雜生物樣品中待測(cè)物的分離。結(jié)合毛細(xì)管柱上檢測(cè)技術(shù)，pCEC可與UVD、熒光檢測(cè)器(FLD)、激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器(LIF)、電化學(xué)檢測(cè)器(ECD)及質(zhì)譜(MS)等多種檢測(cè)手段聯(lián)用。李博祥等采用反相pCEC-UVD技術(shù)，建立了一種高效、簡(jiǎn)便的GCs分析方法，適用于毛發(fā)中GCs的檢測(cè)。使用C18反相毛細(xì)管填充柱(內(nèi)徑100um，毛細(xì)管全長(zhǎng)45cm，有效長(zhǎng)度20cm，ODS填料粒徑3um)，流動(dòng)相為1.5mmol/L的Tris-乙腈溶液(pH8.0，65+35，v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm、分離電壓為-10kV、反壓閥壓力為10.5MPa、泵流速為0.05mL/min，進(jìn)行等度洗脫，倍他米松、地塞米松、潑尼松、潑尼松龍、醋酸潑尼松龍、醋酸氫化可的松、醋酸可的松、皮質(zhì)脂酮等8種GCs在20min內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速分離。各組分的質(zhì)量濃度線性范圍達(dá)到3個(gè)數(shù)量級(jí)，遷移時(shí)間和峰面積的RSD分別小于4.8%和7.4%；不同濃度GCs的回收率為71%～85%；方法LOQ分別為:潑尼松龍0.72ug/g、潑尼松0.72ug/g、倍他米松0.59μg/g、地塞米松1.37ug/g、醋酸可的松1.41μg/g、醋酸潑尼松龍1.07ug/g、醋酸氫化可的松1.03ug/g、皮質(zhì)脂酮1.36μg/g。

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