硝基咪唑類(lèi)藥物測(cè)定方法——高效液相色譜法

時(shí)間：2023-03-24 23:34:51來(lái)源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

硝基咪唑類(lèi)藥物測(cè)定方法——高效液相色譜法

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

(5)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

與GC相比，HPLC不受待測(cè)物的極性、熱穩(wěn)定性、揮發(fā)性等的限制，可同時(shí)檢測(cè)更多的種類(lèi)，大量文獻(xiàn)采用HPLC檢測(cè)各種基質(zhì)中的硝基咪唑類(lèi)藥物。HPLC主要配以紫外檢測(cè)器(ultraviolet detector，UVD)或二極管陣列檢測(cè)器(diode- array detector，DAD；photo-diode array detector，PDA)，硝基咪唑類(lèi)藥物最大吸收波長(zhǎng)在301～312nm之間，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)越大，雜質(zhì)干擾就越少，因此一般設(shè)在300nm以上，多數(shù)為320nm。色譜分離主要采用反相色譜，流動(dòng)相由弱極性有機(jī)溶劑如乙腈或甲醇，與弱酸性溶液如甲酸、乙酸或磷酸等組成。硝基咪唑類(lèi)藥物屬兩性或堿性化合物，較高pH可明顯增加其分離效果和保留時(shí)間。Sun等發(fā)現(xiàn)低含量乙腈可以有效分離極性藥物如MNZOH、RNZ和MNZ，而高含量乙腈可以快速有效洗脫低極性藥物ORZ；同時(shí)，甲醇可以改善峰形和縮短分析時(shí)間。因此，合適甲醇和乙腈比例可以?xún)?yōu)化分離和峰形。流動(dòng)相多采用乙腈、甲醇、緩沖液或水等度或梯度洗脫。

Zhou等用C18反相色譜分離，流動(dòng)相為乙腈-0.01mol/L乙酸鈉緩沖液(9+91，v/v)，流速0.8mL/min，315nm波長(zhǎng)檢測(cè)蜂蜜中5種硝基咪唑類(lèi)藥物(MNZ、DMZ、RNZ、TNZ和HMMNI)。方法LOD為1.0～2.0μg/kg，平均回收率為71.5%～101.4%。Huang等應(yīng)用HPLC同時(shí)測(cè)定蜂蜜中MNZ、RNZ、DMZ和TNZ。色譜柱為T(mén)hermo LC-18(250mm×4.6mmi.d，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-10mmol/L乙酸鈉緩沖液(用乙酸調(diào)節(jié)pH6.5)(15+85，v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)320nm，流速1.0mL/min，進(jìn)樣體積20μL。方法LOD和LOQ分別為0.47～1.52μg/kg和1.54～5.0μg/kg，回收率為71.1%～114%。高小龍測(cè)定蜂蜜和蜂王漿中RNZ、MNZ、DMZ、ORZ和TNZ殘留，采用Hypersli ODS2色譜柱，流動(dòng)相為水-乙腈(90+10，v/v)，流速1mL/min，320nm紫外檢測(cè)。蜂蜜和蜂王漿中RNZ、MNZ、DMZ、ORZ和TNZ的LOQ均為1.0μg/kg，回收率分別為59.2%～70.6%和54.9%～69.1%，CV分別小于18%和16%。

Sams等應(yīng)用HPLC-UVD測(cè)定禽蛋和豬肉中的3種硝基咪唑藥物。色譜柱為Genesis C18 column(250×3.0mm，4mmid.)，流動(dòng)相為pH4的0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(90+10，v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)320nm。方法LOD均為0.5μg/kg；回收率分別為75%(DMZ)，77%(RNZ)和81%(MNZOH)；CV分別為16.4%、11.3%和14.0%。高小龍建立了HPLC測(cè)定雞組織中DMZ和DMZOH的方法。用Hypersli ODS2色譜柱分離，流動(dòng)相為水-甲醇(86+14，v/v)，320nm紫外檢測(cè)。DMZ及DMZOH的LOQ均為1.0μg/kg；肌肉平均回收率在56.9%～76.5%之間，肝臟在63.3%～72.6%之間，腎臟在64.2%～73.3%之間，脂肪在63.5%～75.7%；日內(nèi)CV均小于16%，日間CV均小于15%。王揚(yáng)等采用HPLC-UVD測(cè)定了魚(yú)肌肉中MNZ、DMZ、ORZ、TNZ和RNZ殘留。應(yīng)用C18色譜柱分離，以醋酸銨緩沖液-乙腈(86+14，v/v)為流動(dòng)相，320nm紫外檢測(cè)。5種硝基咪唑類(lèi)藥物的LOD均為1.0μg/kg；羅非魚(yú)中MNZ、DMZ、ORZ、TNZ及RNZ的回收率分別為73.3%、74.7%、62.9%、74.4%、80.1%；測(cè)定RSD不大于10%。Sorensen等測(cè)定魚(yú)肉中MNZ和MNZOH殘留，用反相C18色譜柱分離，流動(dòng)相分別為乙腈～甲醇-pH3.0磷酸溶液(3+9+88，v/v)和乙腈-pH3.0磷酸溶液(8+2，v/v)，梯度洗脫，紫外325nm波長(zhǎng)檢測(cè)。MNZ的LOD為3μg/kg，MNZOH為5μg/kg；MNZ平均絕對(duì)回收率為81%～93%，MNZOH為79%；CV分別為3.3%和3.2%。

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