利用組成型表達載體pMG36e電轉化德式乳桿菌保加利亞亞種的研究

　　來源:中國食品學報　　以典型的乳酸菌組成型表達質粒pMG36e為載體,德式乳桿菌保加利亞亞種為受體,采用電轉化方法研究受體菌

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　　來源:中國食品學報

　　以典型的乳酸菌組成型表達質粒pMG36e為載體,德式乳桿菌保加利亞亞種為受體,采用電轉化方法研究受體菌株的生長狀態與細胞壁處理方式、質粒濃度、電轉化參數、復蘇培養基組成與復蘇培養時間、受體菌株的限制修飾作用對電轉化效率的影響,探討電轉化的最適條件,以提高電轉化效率。

　　結果表明:選擇含2.5%甘氨酸的SMRS培養基培養受體細胞至對數中期,收獲制成感受態細胞,在電場強度12kV/cm、電阻200Ω、電容25μF條件下電擊轉化,以含20mmol/LMgCl2、CaCl2的SMRS培養基復蘇培養2h,涂板篩選得到較高的電轉化效率。特別是采用受體菌株修飾的質粒進行電轉化,轉化效率提高30倍以上,達到6.3×104cfu/μgDNA。

　　本研究結果為進一步構建乳酸菌組成型高效表達系統和食品級基因工程乳酸菌株提供試驗依據。